PCR反应详细基本步骤

更新时间：2024-06-20

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聚合酶链反应技术（Polymerase chain raction ,PCR）是一种在体外扩增特定DNA片段的方法，具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，可用很短时间使目的基因或某一片段扩增十万乃至几百万倍。PCR反应基本步骤：

1、变性：根据DNA高温变性的原理，将反应体系温度升至变性温度（高于模板熔点，约95℃），使目的DNA双链裂解成PCR模板（单链）。[95℃，30s]

2、退火：将反应体系温度骤降至退火温度（低于引物熔点约55℃），是PCR引物与PCR模板3’端杂交，称为退火。[55~65℃，30s]

3、延伸：将反应体系温度升至延伸温度（约72℃），DNA聚合酶按照碱基配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互补链，使目的DNA拷贝数增加1倍。[72℃，30~60s]

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