大鼠ELISA试剂盒的组成结构及检测条件

ELISA试剂盒实验步骤多，新手操作者难免出错。这些错误很多都是细节不够造成的。得到世界科研工作者的认可及推崇，减少这种错误的方法有很多，尤其是国内生化领域的长足发展。

大鼠ELISA试剂盒组成结构：

1、血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。

3、细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。

5、保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

检测大鼠ELISA试剂盒结果必要条件可分为三个：

1、ELISA加样步骤

在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀宜轻缓，避免气泡,可上下倒置混和，不要在混匀器上强烈振荡。

制备血浆标本需借助于抗凝剂，而血清标本只要待血清天然凝固、待其收缩后即可取得。也可在板孔中加入稀释液，再在其加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。

一般说来，在5天内测定的血清标本可放置于4℃，超过一周测定的需低温冰存。可用作ELISA测定的标本十分广泛，体液、分泌物和排泄物等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份，ELISA试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保留。

2、固相载体

加酶结合物应用液和底物用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。每次加标本应更换吸嘴，以发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。

良好的仪器和准确的操纵是保证ELISA试剂盒检测结果正确可靠的必要条件。ELISA顶用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。有些标本可直接进行测定，有些则需经预处理。

3、标本因素

血清标本可按常规方法采集，应留意避免溶血，红细胞溶解时会开释出具有过氧化物酶活性的物质，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。

如在冰箱中保留过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。本文将叙述板式ELISA各个操纵步骤的留意要点，国外试剂均与特殊仪器配合应用，严格遵照划定操纵，必能得出正确的结果。